关于加强汛期饮用水水源环境监管工作的通知
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关于加强汛期饮用水水源环境监管工作的通知
关于加强汛期饮用水水源环境监管工作的通知
环办[2011]94号
各省、自治区、直辖市环境保护厅（局），新疆生产建设兵团环境保护局，辽河保护区管理局：
随着2011年汛期的到来，各地洪涝灾害频发，一些地区洪水冲刷地表土壤和临近河岸的固体废弃物进入水体，对饮用水水源环境安全构成了严重威胁。为防止汛期和退水期发生重大水污染事件，切实保障饮用水水源环境安全，现通知如下：
一、全面加强汛期环境监管，强化汛期水质监测
有针对性地制定并实施汛期综合污染防治方案，加强对潜在污染事故源和饮用水源等敏感水域的环境监管和水质监测。切实加强对可能影响饮水安全的制药、化工、造纸、冶炼等重点行业、重点污染源、尾矿库以及城镇污水处理厂的监督管理，确保污水处理设施正常运行。监测中一旦发现水质超标，要及时报告，并采取必要的处置措施。同时，加强跨地区河流交界断面水质的监督管理，严禁向下游集中排放污水。对交界断面要加密监测，发现水质异常、可能或已经发生污染事件的要及时报告，并及时向下游地区和有关部门通报。
二、严格排查环境隐患，确保饮用水水源环境安全
积极防范、主动应对汛期次生环境灾害，以保障饮用水水源水质安全为重点，全面排查饮用水水源保护区、准保护区内及上游地区的环境风险；对存在重大隐患、可能造成水体污染的风险源，积极采取有效措施，及时清理和整改，防患未然。一旦发生饮用水水源污染事故，要迅速查清并切断污染来源，在当地政府的统一领导下，开展污染防控工作，确保汛期群众饮水安全。
三、进一步完善预警制度，及时应对突发环境事件
各级环保部门应根据当地气象特征、水文条件和污染源排污情况，主动与有关部门联系，及时了解和掌握汛期主要水利工程调蓄水期及主要河流流量变化趋势，制定汛期水环境污染事故应急预案。根据“以防为主、防治结合”的原则，按照《关于加强汛期环境应急管理工作的通知》（环办函〔2011〕503号）的要求，完善环境污染事件预警机制，制定应急措施。各级环保部门要进一步完善应急预案，一旦发生突发环境污染事件，要迅速启动应急响应，及时准确发布有关信息，最大限度地减轻事件造成的危害和影响，保障饮用水水源环境安全；要严格按照《突发环境事件信息报告办法》（环境保护部令第17号）规定，报告突发环境事件信息，特别是涉及饮用水安全以及社会关注度较高的突发环境事件，坚决杜绝迟报、谎报、瞒报、漏报行为。
四、高度重视饮用水水源地评估工作，及时整改突出问题
扎实开展城市集中式饮用水水源环境状况评估工作，认真分析饮用水水源地环境保护工作中存在的问题，及时向当地政府报告，并采取积极措施加以解决。进一步加大饮用水水源地环境保护投入，积极防范各类环境风险，不断加强环境监管能力，进一步提升饮用水水源环境安全保障水平。
特此通知。
二○一一年七月二十八日
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国家工商行政管理局关于积极开展反盗窃斗争，全面整顿废旧金属收购行业的通知
国家工商行政管理局关于积极开展反盗窃斗争，全面整顿废旧金属收购行业的通知
国家工商局
各省、自治区、直辖市及计划单列市工商行政管理局：
近年来，盗窃犯罪活动十分猖獗，给国家经济建设和人民群众生活造成了严重危害。中央社会治安综合治理委员会决定在全国开展反盗窃斗争。整顿废旧金属收购行业是这次反盗窃斗争的一项重要内容。各地工商行政管理机关要积极行动起来，在当地党委和人民政府的领导下，与公安
、物资、商业等有关部门密切配合，坚决贯彻落实中央社会治安综合治理委员会的部署，切实加强对废旧金属收购行业的管理，为夺取反盗窃斗争的胜利发挥应有的作用。现就有关问题通知如下：
一、提高思想认识，做好宣传工作。开展反盗窃斗争，对于实现社会治安的综合治理，保持社会安定，保障经济建设和改革开放的顺利进行，促进社会主义精神文明建设和社会风气的好转，都具有重大的意义。工商行政管理机关对开展这项斗争负有义不容辞的责任，一定要按照统一部
署，认真抓紧、抓好。要运用广播、黑板报、张贴通告等多种形式，广泛宣传反盗窃斗争的意义和有关法律、政策，使群众懂法守法，并通过对典型案件的公开处理，震慑违法犯罪分子，教育群众，提高人民群众对反盗窃斗争重要性的认识和同盗窃犯罪活动作斗争的积极性。
二、对废旧金属收购站点进行清理整顿。各地工商行政管理机关要组织足够的力量，会同有关部门，严格依法清理整顿本地区的废旧金属收购站点。凡经营废旧金属的收购站点，须经所在地公安机关审查同意，向工商行政管理机关申请登记，经核发营业执照后，方准营业。未经审查、
核准登记注册，一律不得从事废旧金属的收购活动。违者，依法取缔。钢厂、油田、铁路工地和厂矿企业附近不准设立生产性废旧金属收购站点。凡不符合规定的，一律撤销关闭。农村小冶炼厂、小加工厂一律不得违法收购生产性废旧金属。
三、对收购废旧金属的个体工商户要严格审查。个体工商户收购废旧金属只限于收购个人出售的生活器皿，废旧工具、农具和自行车、人拉车等零配件。收购的生活性废旧金属，一律交售给国营废品收购站点。禁止个人收购生产性废旧金属。对违反规定收购生产性废旧金属的，要严肃
查处；情节严重的，要吊销营业执照。无证经营的要坚决取缔。今后，各地对申请从事废旧金属收购行业的个体工商户，要从严审批。
四、加强对废旧物品收购站点和个体工商户的日常监督检查。凡到收购站点出售生产性废旧金属的，企事业单位需持有单位出具的证明；个人需持有街道居民委员会或村民委员会出具的证明和本人的居民身份证。收购站点应当认真登记出具证明的单位和个人姓名、住址，物品的名称、
数量等；发现有可疑人员、可疑物品或者公安机关要求检查的赃物，应及时向公安机关报告，并扣留可疑物品、赃物，不得隐瞒、包庇。禁止任何单位和个收购各种枪支、弹药、爆炸物品、剧毒物品、放射性物品及其盛装容器；以及个人出售的铁路、油田、邮电、市政、军用的设备或者器
材，要检查废品收购站点是否收购了违禁物品，是否建立了收购登记制度；个体工商户是否违法收购了生产性废旧金属。对违法经营的要坚决查处，堵塞盗窃销赃渠道。
五、对无照经营的单位或个人以及违反国家有关规定及上述规定的，由工商行政管理机关依法查处；情节严重的，吊销营业执照；触犯刑律的，移送司法机关依法处理。
六、加强废旧金属市场管理，废旧金属专业市场的设立，须经工商行政管理机关批准。对进场经营者要严格审查，并制订严格的治安管理措施，切实加强管理。生产性废旧金属不准进入集贸市场交易。
1991年9月24日
关于进境鸵鸟检疫有关问题的通知
关于进境鸵鸟检疫有关问题的通知
（动植检动字〔１９９６〕８７号）
各直属口岸动植物检疫局、动物检疫所：
近年来，鸵鸟的引进和繁养在我国呈现了迅猛发展的势头，为满足引进鸵鸟及其种蛋的需要，一年多来，我们先后与美国、加拿大、法国、荷兰、津巴布韦、博茨瓦那、澳大利亚和纳米比亚签署了进境鸵鸟的检疫和卫生条件议定书，从而为引进鸵鸟在检疫方面铺平了道路。随着鸵鸟的大量引进，我们的检疫工作也日趋繁重，而鸵鸟的检疫在我国还是个崭新的课题，为总结近年来进境鸵鸟的检疫经验，进一步提高检疫水平，防止疫病随进口鸵鸟及其种蛋传入我国，使鸵鸟的检疫工作更加规范化和标准化，保证进境鸵鸟检疫工作的顺利进行，现就进境鸵鸟及其种蛋入境后的检疫工作的有关问题通知如下：
一、进境鸵鸟检疫
1．鸵鸟入境后须在口岸动植物检疫局指定的隔离场所进行为期45天的隔离检疫
，如须延长隔离检疫时间，须报国家局批准。
2．鸵鸟运抵隔离场一周后，逐只进行采血采样，并分成两份，其中一份保存备
查，并注意编号。
3．隔离检疫期间的实验室检疫项目，主要依照我国与输出国缔结的鸵鸟检疫议
定书规定的实验室检疫项目进行。如发生特种情况可做特殊检疫项目。
4．实验室检疫的操作试行程序附后。
二、进境鸵鸟种蛋检疫
1．进境种蛋的孵化厂须获得口岸动植物检疫机关的认可。
2．进境鸵鸟种蛋在入孵前，须用有效的消毒药进行熏蒸处理。
3．进境种蛋不得与其他种蛋一同孵化。
4．首次孵出的小鸟须在口岸动植物检疫机关认可的场所由口岸检疫机关隔离检
疫30天，在此期间采样并依照我国与输出国缔结的鸵鸟种蛋的检疫议定书规定的项目作实验室检疫。
三、其他未尽事宜按《进境动物检疫管理办法》执行。
四、在执行过程中有何问题，请及时上报国家局。
附件：鸵鸟疫病实验室检疫操作试行规程
中华人民共和国动植物检疫局
一九九六年八月二十六日
鸵鸟沙门氏菌泄殖腔拭子培养规程（试行）
一、材料：
灭菌棉拭子、缓冲蛋白胨水、亚硒盐胱氨酸增菌液、胆硫乳琼脂、三糖铁琼脂、生化试验管、多价血清因子、细菌培养必需设备。
二、操作方法：用无菌棉拭子从泄殖腔取样，放无菌瓶中，尽可能冷藏于2～4℃，编号后送实验室检验。
三、实验室检验：
┌────────┐
│ 棉拭子样品 │
└─┬──────┘
│
┌─────┴─────┐
│ 缓冲蛋白胨水 │
└───┬───────┘
３７℃ │１８￣２４hr
┌──┴───────┐
│ 亚硒盐胱胺酸增菌液 │
└─┬────────┘
３７℃│ １８￣２４hr
│
┌───┴───┐
│ ＤＨＬ培养基 ├────────────────┐
└─┬─────┘ │
┌──┴───────┐ ┌──┴────┐
│挑取可疑菌落划线接种│ │ 可疑菌落 │
└────┬─────┘ └──┬────┘
│ │
┌───┴────┐ │
│ 三糖铁培养基 │ │
└──┬─────┘ ┌────┴──────┐
│ │ 革兰氏染色，镜检 │
３７℃ │ １８￣２４hr │ │
│ └────────┬──┘
┌─┴──┐ │
┌─┤细菌鉴定├───┐ │
│ └────┘ │ │
│ │ │
┌┴───┐ ┌─┴──────┐ │
│生化试验│ │ 血清学试验 │ │
└─┬──┘ └┬───────┘ │
│ ┌┴─────┐ │
└───────┤综合判定结果├─────────────┘
└─┬────┘
┌─┴────────┐
│ 试验结果报告 │
└──────────┘
鸵鸟鹦鹉热间接血凝（IHA）操作规程（试行）
一、本规程适用于鸵鸟衣原体病的诊断。
二、材料
衣原体属抗原致敏绵羊红细胞
标准阴、阳性对照血清
被检血清：采集鸵鸟血清，试验前于56℃水浴灭活30分钟。
90度V型反应板
灭菌生理盐水
微量加样器
三、试验方法
1．将生理盐水滴于V型反应板中，每孔50ul。
2．取被检血清50ul于第一孔中，与生理盐水混匀后吸50ul于第二孔，依次作倍
比稀释至1∶16。
3．将1∶8和1∶16两孔各加25ul抗原，如作定量试验可根据实际需要自行决定。
4．对照试验：设阳性血清＋抗原、阴性血清＋抗原、生理盐水＋抗原各一孔。
四、血凝反应程度的标准：
“＋＋＋＋”：红细胞全部凝集，形成一层均匀的膜，布满整个孔底。
“＋＋＋”：红细胞在孔底形成一层薄膜，面积比前者稍小。
“＋＋”：红细胞在孔底形成薄层凝集，边缘松散或呈锯齿状。
“＋”：红细胞在孔底呈稀薄、散在、少量凝集，孔底有小圆点。
“＋”：红细胞沉于孔底，但周围不光滑或中心有空斑。
“—”：红细胞完全沉于孔底，呈光滑的圆点。
“＋＋”以上的凝集判为阳性凝集。
五、结果判定
1．对照试验：出现如下结果试验方可成立，否则应重试，阳性血清＋抗原呈“
＋＋＋＋”；阴性血清十抗原呈“-”；抗原十生理盐水
2．被检样品判定标准：血清效价＞1∶8（＋＋）判为阳性。
鸵鸟新城疫、禽流感、付粘病毒分离操作规程（试行）
本规程适用于新城疫、禽流感、付粘病毒的分离
一、材料
1．消毒棉拭子
2．灭菌试管
3．灭菌生理盐水
4．泄殖腔棉拭子保存液：PBS，PH7．2-7.4，青霉素1万单位／ml，链霉素10mg/m1，庆大霉素250ug/ml，制霉素5000u／ml。
5．SPF种蛋。
6．90度V型反应板。
7．微量加样器。
二、操作方法
1．将采集的泄殖腔棉拭子置于样品保存液中，置4℃过夜。次日3000rpm离心10min，上清液作菌检后接种9～10日龄鸡胚（每胚0．2ml），37℃再孵育5天，去掉24小时死亡的鸡胚，其他鸡胚放4℃冷却后，检测鸡胚尿囊液的血凝滴度。如尿囊液
的血凝反应呈阴性，应再用鸡胚盲传2代。
2．将收集的尿囊液用PBS以25ul量进行倍比稀释，加25ul的1％鸡红细胞，轻轻
混匀，静置15～30min，判定血凝滴度。
如鸡胚尿囊液的血凝试验呈阳性，应分别用新城疫病毒、禽流感病毒、副粘病毒的阳性血清作血凝抑制试验以检测病毒的种类。
表一 鸡胚尿囊液血凝试验 （单位：ul）
┌─────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬───┬────┐
│ 孔号 │ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │ 11│ 12 │
├─────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼───┼────┤
│抗原稀释度│ 1∶2 │ 1∶4 │ 1∶8 │1∶16 │1∶32 │ 1∶64 │ 1∶128│ 1∶256│ 1∶512│1∶1024 │对照 │对照 │
├─────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼───┼────┤
│ 生理盐水│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 50│ 50 │
├─────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼───┼────┤
│ 抗原 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ │ │
├─────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼───┼────┤
│1％红细胞 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ 25 │
└─────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴───┴────┘
室温15min，每5mim观察一次
┌─────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬───┬────┐
│ 判定举例│++++ │++++ │++++ │+++ │ ++ │ - │ - │ - │ - │ - │ - │ - │
└─────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴───┴────┘
禽流感血凝抑制试验操作程序（试行）
一、试验材料
1．抗原：禽流感病素H5、H7型抗原；
2．阴、阳性对照血清。
3．红细胞：无菌采集鸡血液5～10ml于少许阿氏液中摇匀，以洗涤3～5次，每次3000rpm离心10min，将血浆、白细胞充分洗去至上清液清亮，再将沉淀的红细胞稀释成1％的红细胞悬浮液（RBC）；
4．被检血清：采集被检鸵鸟血液，离心分离血清，56℃灭活30min；
5．稀释液：灭菌的生理盐水或PBS（pH7．2～7．4）
6．90度V型反应板，微量加样器。
二、试验操作
1．血凝试验（HA）：
取干净的微量滴定板（V型）一块，按表一进行操作：每孔加25ul生理盐水，孔
1加禽流感抗原25ul，用移液器反复吹打混匀三次；吸出25ul于孔2，吹打混匀后吸出25ul于孔3；如此依次稀释到孔10，孔10混匀后吸出25ul弃掉。孔11、12不加抗原
，只加生理盐水作空白对照。加入1％的红细胞悬浮液25ul，充分振荡后置于室温；
每5min观察一次，15～30min后判定结果，并作好记录。
表一 禽流感血凝试验 （单位：ul）
┌─────┬───┬───┬───┬───┬───┬───┬────┬────┬────┬────┬───┬───┐
│ 孔号 │ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │ 11│ 12│
├─────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│抗原稀释度│ 1∶2│ 1∶4│ 1∶8│1∶16 │1∶32 │1∶64 │ 1∶128│ 1∶256│ 1∶512│1∶1024 │对照 │对照 │
├─────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│生理盐水 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 50│ 50│
├─────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│ 抗原 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ │ │
├─────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│1％红细胞 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ 25│
└─────┴───┴───┴───┴───┴───┴───┴────┴────┴────┴────┴───┴───┘
室温15min，每5min观察一次
┌─────┬───┬───┬───┬───┬───┬───┬────┬────┬────┬────┬───┬───┐
│ 判定举例│ + │ + │ + │ + │ + │ + │ + │ - │ - │ - │ - │ - │
└─────┴───┴───┴───┴───┴───┴───┴────┴────┴────┴────┴───┴───┘
抗原的血凝滴度是凡能使1％的鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数；因此，
能使红细胞完全凝集的最高稀释倍数的病毒液25ul称为1个血凝单位（HA）。如该抗
原的血凝单位为1∶128／25ul。
在进行禽流感血凝抑制试验时，病毒的工作浓度应为8HA。因为该试验的抗原的
血凝单位为1∶128／25ul，按其孔号数（孔．7）倒退3孔的稀释倍数（孔4 1∶16）
，作为该病毒的工作浓度：1∶16／25ul。
2．血凝抑制试验（HI）：
取干净的微量滴定板（V型）一块，按表二进行操作：每孔加25ul生理盐水，孔
1加待检血清25ul，用移液器反复吹打混匀三次；吸出25ul于孔2，吹打混匀后吸出25ul于孔3；如此依次稀释到孔8，孔8混匀后吸出25ul弃掉。孔9作为阳性血清对照，孔10作为阴性血清对照，孔11不加任何血清而作为抗原对照，孔12不加抗原和任何血清，只加PBS作空白对照。各孔加入1％的红细胞悬浮液25ul，充分振荡后置于室温；每5min观察一次，15～30min后判定结果，并作好记录。
未免疫的健康鸵鸟血清无血凝抑制作用，各稀释倍数均出现红细胞凝集现象；禽流感感染或免疫的鸵鸟血清能抑制禽流感病毒对红细胞的凝集作用。凡能使8HA的
抗原凝集红细胞作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清的血凝抑制价（如表二的血凝抑制价为1∶64）。
表二 禽流感血凝抑制试验 （单位：ul）
┌──────┬───┬───┬───┬────┬────┬───┬────┬────┬────┬────┬───┬───┐
│ 孔号 │ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │ 11│ 12│
├──────┼───┼───┼───┼────┼────┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│血清稀释度 │ 1∶2│ 1∶4│ 1∶8│ 1∶16 │ 1∶32 │1∶64 │ 1∶128│ 1∶256│ 阳性 │ 阴性 │抗原 │对照 │
├──────┼───┼───┼───┼────┼────┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│ 生理盐水 │ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 50│ 75│
├──────┼───┼───┼───┼────┼────┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│ 被检血清 │ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25│ 25 │ 25 │ (25)│ (25)│ │ │
├──────┼───┼───┼───┼────┼────┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│ 8HA抗原 │ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ │
└──────┴───┴───┴───┴────┴────┴───┴────┴────┴────┴────┴───┴───┘
室温感作5～6min
┌──────┬───┬───┬───┬────┬────┬───┬────┬────┬────┬────┬───┬───┐
│ 1％红细胞 │ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ 25│
└──────┴───┴───┴───┴────┴────┴───┴────┴────┴────┴────┴───┴───┘
室温15min，每5min观察一次
┌──────┬───┬───┬───┬────┬────┬───┬────┬────┬────┬────┬───┬───┐
│ 判定举例 │ - │ - │ - │ - │ - │ + │ + │ + │ + │ + │ + │ + │
└──────┴───┴───┴───┴────┴────┴───┴────┴────┴────┴────┴───┴───┘
3．判定标准
1）判定时应首先观察各对照孔是否完全符合；
2）红细胞凝集：红细胞分散在孔底四周呈均匀的颗粒状凝集且布满整个孔底，
判为血凝作用为阳性“十”；
3）无凝集或凝集抑制：红细胞集中于孔底中央呈点状，判血凝作用为阴性“—
”，或判血凝抑制作用为阳性；
4）血凝抑制价：凡能使抗原的血凝作用完全受到抑制的最高血清稀释倍数；
5）被检血清的血凝抑制价在1∶8以上者，判为阳性反应；
6）最后判定时间与感作时间有关。温度高时感作时间短，15min即可；温度低时可适当延长，但最长不得超过30min。
禽流感琼脂扩散试验操作规程（试行）
1．琼脂凝胶平板的制备：称取琼脂糖1g，氯化钠8．5g，加入100ml蒸馏水，10磅10分钟高压溶解后，冷却至45℃，加入0．01％叠氮钠，每个直径6CM平皿加7ml融化琼脂，厚度为2．8mm，待凝固后置冰箱内片刻。
2．打孔：中间一孔，周围六孔为一组，孔径3mm，孔居2．5mm。
3．加样：中心孔加抗原，周围1、3、5孔加阳性血清，2、4、6孔加被检血清。
4．加样后置湿盒内，于室温下感作。
5．结果判定：24小时初判，48小时终判，阳性对照成立时，进行判定。
阳性：被检血清孔与抗原孔之间出现致密沉淀线，并与标准阳性血清的沉淀线末端互相联接。
可疑：标准阳性血清孔和抗原孔之间的沉淀线向被检血清孔内侧弯曲。
阴性：抗原孔与被检血清孔之间不出现沉淀线或标准阳性血清与阳性孔间的沉淀线向毗邻的被检血清孔直伸或其外侧偏弯。
禽副粘病毒血凝抑制试验操作程序
一、试验材料
1．抗原：禽副粘病毒病毒Ⅱ型抗原；
2．红细胞：无菌采集鸡血液5～10ml于少许阿氏液中摇匀，以洗涤3～5次，每次3000离心10min，将血浆、白细胞充分洗去至上清液清亮，再将沉淀的红细胞稀释
成1％的红细胞悬浮液（RBC）；
3．被检血清：采集被检鸵鸟血液，离心分离血清，56℃灭活30min；
4．稀释液：灭菌的生理盐水或PBS（pH7．2～7．4）
5．阴、阳性对照血清
6．90度V型反应板，微量加样器。
二、试验操作
1．血凝试验（HA）：
取干净的微量滴定板（V型）一块，按表一进行操作：每孔加25ul生理盐水，孔
1加禽流感抗原25ul，用移液器反复吹打混匀三次；吸出25ul于孔2，吹打混匀后吸出25ul于孔3；如此依次稀释到孔10，孔10混匀后吸出25ul弃掉。孔11、12不加抗原
，只加生理盐水作空白对照。加入1％的红细胞悬浮液25ul，充分振荡后置于室温；
每5min观察一次，15～30min后判定结果，并作好记录。
表一 禽副粘病毒血凝试验 （单位：ul）
┌──────┬───┬───┬───┬───┬───┬───┬────┬────┬────┬─────┬───┬───┐
│ 孔号 │ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │ 11│ 12│
├──────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼─────┼───┼───┤
│抗原稀释度 │ 1∶2│ 1∶4│ 1∶8│1∶16 │1∶32 │1∶64 │ 1∶128│ 1∶256│ 1∶512│ 1∶1024 │对照 │对照 │
├──────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼─────┼───┼───┤
│ 生理盐水 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 50│ 50│
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│ 抗原 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ │ │
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